一、逆轉(zhuǎn)錄病毒介紹
逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus），又稱反轉(zhuǎn)錄病毒，是一類RNA病毒，需在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下首先將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA，新合成的cDNA插入宿主的核DNA中，隨宿主DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯達到擴增目的。逆轉(zhuǎn)錄病毒科可分為7個屬：α逆轉(zhuǎn)錄病毒屬（Alpharetrovirus）、β逆轉(zhuǎn)錄病毒屬（Betaretrovirus）、γ逆轉(zhuǎn)錄病毒屬（Gammaretrovirus）、δ逆轉(zhuǎn)錄病毒屬（Deltaretrovirus）、ε逆轉(zhuǎn)錄病毒屬（Epsilonretrovirus）、慢病毒屬（Lentivirus）和泡沫病毒屬（Spumavirus）。
逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)構(gòu)
逆轉(zhuǎn)錄病毒是一種RNA病毒，其兩端為長末端重復(fù)序列（LTR），病毒顆粒為二十面體對稱結(jié)構(gòu)、球形，有包膜，表面有刺突，大小約80-120nm，基本結(jié)構(gòu)包括包膜蛋白、基質(zhì)、衣殼蛋白、核衣殼蛋白，以及病毒復(fù)制所需的酶(包括逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶)。
逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)構(gòu)圖
逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組
逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因組為二倍體，含兩個相同單鏈RNA（+ssRNA），是一種連續(xù)線性單鏈RNA，長度為7-12 kb。簡單逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因組包含三個主要的編碼段和一個小的編碼域，主要片段包含三個基因gag、pol和env： gag基因編碼病毒衣殼、基質(zhì)等結(jié)構(gòu)蛋白的基因，pol基因編碼逆轉(zhuǎn)錄酶(p66/p51)、蛋白水解酶和整合酶，env基因編碼gpl20和gp41兩種包膜糖蛋白；小編碼域包含前基因pro，該基因編碼病毒蛋白酶。
逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組結(jié)構(gòu)圖（Endogenous Retroviruses in the Genomics Era）
逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細胞過程
逆轉(zhuǎn)錄病毒只能在宿主細胞內(nèi)復(fù)制，主要包括以下過程:病毒吸附在細胞表面，病毒包膜蛋白與細胞表面受體結(jié)合，囊膜與細胞膜融合，病毒顆粒進到細胞內(nèi)，基因組RNA逆轉(zhuǎn)錄為雙鏈DNA，進入細胞核并整合到宿主染色質(zhì)上，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生病毒RNA；病毒RNA從細胞核遷移到細胞質(zhì)中，翻譯產(chǎn)生病毒蛋白，經(jīng)過自組裝后，包裹病毒基因組RNA形成未成熟病毒顆粒，以出芽的方式釋放到細胞外，經(jīng)病毒蛋白酶剪切多蛋白，成為成熟的子代病毒顆粒。
逆轉(zhuǎn)錄病毒可以與多種細胞表面蛋白結(jié)合而進入細胞，其宿主細胞范圍很廣，主要由病毒顆粒表面的包被蛋白(env)決定。
逆轉(zhuǎn)錄病毒特點
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逆轉(zhuǎn)錄病毒具有廣泛的宿主范圍，可以廣泛感染多種細胞類型，且整合率高；
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逆轉(zhuǎn)錄病毒能與宿主細胞DNA整合，可以介導(dǎo)外源基因穩(wěn)定、長期表達；
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逆轉(zhuǎn)錄病毒主要感染分裂期的細胞，適用于干細胞相關(guān)的研究。
二、逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)介紹
逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)通常指的是γ逆轉(zhuǎn)錄病毒，表達系統(tǒng)由逆轉(zhuǎn)錄表達載體、輔助載體（表達病毒包裝需要的蛋白質(zhì)）和包裝細胞系組成，由于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體能將單鏈RNA（ssRNA）基因組轉(zhuǎn)換為dsDNA分子，可以高效的將外源基因穩(wěn)定的整合到哺乳動物細胞基因組，目前已被廣泛應(yīng)用于基因轉(zhuǎn)移載體系統(tǒng)。逆轉(zhuǎn)錄病毒主要包括MMLV（莫洛尼氏鼠白血病逆轉(zhuǎn)錄病毒）和MSCV（鼠干細胞病毒），其優(yōu)勢之一是載體基因組可永久整合到宿主基因組中，實現(xiàn)外源基因的長期穩(wěn)定表達；因無法穿過核膜，僅能通過細胞分裂期不完整的核膜感染細胞，故僅適用于分裂期細胞。其局限性主要為載體容量較小、包裝病毒滴度較低。從應(yīng)用場景來看，MMLV可高效將外源基因穩(wěn)定整合到宿主基因組，在iPSC制備中應(yīng)用廣泛；MSCV則更適合胚胎干細胞、胚胎癌細胞、造血干細胞等的轉(zhuǎn)基因表達。
下圖為逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝示意圖：
維真生物現(xiàn)可提供從質(zhì)粒構(gòu)建到逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝的全流程服務(wù)項目，并可根據(jù)您的實驗需求進行個性化定制。下圖為MMLV載體的示意圖：
服務(wù)流程
維真生物現(xiàn)可提供從質(zhì)粒構(gòu)建到逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝的所有服務(wù)項目，并可根據(jù)您的實驗需要進行定制。具體定制方案請在線聯(lián)系我們，或致電400-077-2566。
